貨號:CA1004500/CA1004100

 

規格:500mL/100mL

 

儲存條件:基礎培養基2 ~ 8℃,添加劑-80 ~ -20℃;混勻后2 ~ 8℃,4周內使用完畢。產品簡介:

MSCeasy人間充質干細胞培養基是賽貝生物(Cellapy)開發出的一種化學成分明確、不含血清,無需鋪底的間充質干細胞(hMSC)完全培養基。本培養基可用于多種來源的人類間充質干細胞的原代細胞分離及細胞傳代,同時還能保持其多向分化的潛能,如骨髓

BM-hMSC)、脂肪組織(AT-hMSC)、臍帶(UCM-hMSC)。使用本產品無需添加血清或血清替代物,產品批間差異小,細胞倍增速度較快。

產品內容:

 

 

組份代碼

 

名稱

 

規格

 

數量

 

CA1004500-1/CA1004100-1

 

MSCeasy 人間充質干細胞基礎培養基

 

500mL/100mL

 

1 瓶

 

CA1004500-2/CA1004100-2

 

MSCeasy 人間充質干細胞添加劑

 

25mL/5mL

 

1 瓶

 

需要材料:

 

· MSCeasy人間充質干細胞培養基(Cellapy:Cat. CA1004500/CA1004100)

 

· 細胞培養級無鈣鎂的PBS溶液(Cellapy,Cat. CA3017500)

 

· MSCeasy人間充質干細胞消化液(Cellapy:Cat. CA1006500)


· 細胞培養級DMSO(Sigma:Cat. D2650) 培養材料準備:

MSCeasy人間充質干細胞完全培養基:37℃水浴解凍MSCeasy添加劑(有少量不溶物,屬于正常現象),吹打混勻后將添加劑加到基礎液中,配成 MSCeasy人間充質干細胞完全培養基

5mL添加劑與100mL基礎培養基混合)。使用0.22μm一次性過濾器過濾完全培養基,將不溶物過濾掉。

MSCeasy人間充質干細胞完全培養基可在2 ~ 8℃儲存4周,盡快使用完畢,以免效價下降。

 

注:MSCeasy人間充質干細胞添加劑化凍后會有一些沉淀,屬于正常現象,使用細胞濾網過濾即可。

可按實際用量對添加劑進行分裝,分裝后重新置于-80 ~ -20℃保存,避免反復凍融。細胞復蘇:

1. MSCeasy人間充質干細胞完全培養基取出并平衡至室溫,將適量的培養基加入培養皿/ 瓶,將培養皿/瓶放置于37℃孵育15min。

培養皿規格如下:

 

培養器皿規格

培養基體積(mL)

消化液 (mL)

T75 瓶

≥12

5

T175 瓶

≥28

12

T225 瓶

≥35

15

10 cm大皿

≥10

4

6孔板

≥2

1

實際操作時可以根據細胞密度情況調整加液量,不能少于上述量


2. 37℃水浴解凍細胞,小心搖晃使細胞融化至僅剩一小塊冰晶,迅速取出并用75%酒精消毒凍存管外表面,轉移至無菌操作臺中。

3. 將細胞懸液轉移至15mL離心管中,緩慢加入4mL MSCeasy人間充質干細胞完全培養基,輕柔吹吸2次混勻。

4. 1000 rpm離心3 min,棄上清。

 

5. 加入適量MSCeasy人間充質干細胞完全培養基重懸細胞,輕柔吹吸2次混勻,并接種到準備好的培養皿/瓶中。

6. 水平十字搖勻,5% CO2的37℃恒溫細胞培養箱中培養24小時。消化傳代:

1. MSCeasy人間充質干細胞完全培養基取出并平衡至室溫。

 

2. 在顯微鏡下觀察細胞,當細胞融合度達到80-90%即可傳代。吸走待傳代細胞培養皿/瓶中MSCeasy人間充質干細胞完全培養基,并且加入無鈣鎂的PBS溶液洗一次。

3. 加入MSCeasy人間充質干細胞消化液使之完全覆蓋皿/瓶底。

 

4. 室溫放置5 ~ 8分鐘或37℃恒溫細胞培養箱中孵育3 ~ 5分鐘,顯微鏡下觀察到大部分變圓開始脫離皿/瓶底,表明細胞消化時間理想。注意:不同細胞的消化時間不同,請摸索合適的時間,過度消化會導致細胞死亡以及傳代后補貼壁。

5. 用移液器輕輕吹打皿/瓶壁上未完全脫離的細胞,并將細胞懸液轉移到15 mL 離心管中, 1000 rpm離心3 min,棄上清,加入1 mL完全培養基重懸細胞,將一定數量的MSC細胞接


種于新培養皿/瓶中,推薦細胞接種數量為3000-5000個/cm2。水平十字搖勻, 將培養瓶置于37℃,5%CO2 條件下培養。

細胞凍存:

 

1. 配制凍存液:90% MSCeasy人間充質干細胞完全培養基+10% DMSO,現配現用;

 

2. 吸走待傳代細胞培養皿/瓶中的MSCeasy人間充質干細胞完全培養基,并且加入無鈣鎂

 

PBS溶液洗一次。

 

3. 加入MSCeasy人間充質干細胞消化液使之完全覆蓋皿/瓶底。

 

4. 室溫放置5 ~ 8分鐘或37℃恒溫細胞培養箱中孵育3 ~ 5分鐘,顯微鏡下觀察到大部分變開始脫離皿/瓶底,表明細胞消化時間理想。

5. 用移液器輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細胞,并將細胞懸液轉移到15 mL 離心管中,1000

 

rpm離心3 min,棄上清。用凍存液輕輕重懸細胞,隨后用移液器扇形吹打培養皿/瓶底, 使皿/瓶底貼附的細胞集落脫落,輕柔緩慢吹吸混勻。

6. 將重懸的細胞加入滅菌的凍存管中,按照復蘇所需要的量,例如1 ~ 5×106/mL,每管1mL 凍存,旋緊凍存管蓋。迅速將凍存管放入程序降溫盒中,將程序降溫盒放入-80℃冰箱

7. 24 h后將細胞從-80℃冰箱轉移至液氮中長期保存。

2018年10月12日

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